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     微量BCA蛋白定量試劑盒說明書

MicroBCAProteinAssayKit                                                            

微量BCA蛋白定量試劑盒

Cat.No.  K2011                       

保存：BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：2-8℃

      其 它 組

分：室溫

組分說明

Catalogno.                  K2011

Volume                      120ml

MicroBCAReagentA （MA）               120ml

MicroBCAReagentB （MB）               120ml

MicroBCAReagentC （MC）                6ml

BSA （2mg/ml）                             2ml

產(chǎn)品簡介

      BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于 BCA（BicinchoninicAcid）法研制而成，實現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與 Cu²⁺絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時將 Cu ²⁺ 還原成 Cu ⁺BCA 試劑可敏感特異地與Cu⁺結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物。在562nm 處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可根據(jù)吸收值的大小來測定蛋白質(zhì)的含量。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計，可精*&確測定濃度為 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測量差異極低。本試劑同多種非離子型去污劑有較好的相容性。

注意事項 

 1.  BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋）。

2.  操作中請佩戴手套。

3.  本產(chǎn)品僅限科研使用。

操作步驟

 1.  稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。

 

管號     稀釋液用量（μl）   標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl）   終濃度（μg/ml）

 

A               360                40                200

B               400         100（從A管中?。?nbsp;           40

C               250         250（從B管中?。?nbsp;           20

                                                      （從  管中取）

D               250         250    C                   10

E               250         250（從D管中?。?nbsp;             5

 

F               250         250（從E管中?。?nbsp;             2.5

 

G               250                0                0(空白)

 

 2.  配制 MicroBCA 測試工作液：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的數(shù)量配制測試液。

試劑 MD 配制：4volumeMC+100volumeMB

測試工作液 WR 配制： 1volumeMA+1volumeMD

充分混勻后待用

 3.  試管及微板檢測（蛋白濃度檢測范圍：2.5-200 μg/ml）

    1）按上表準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品。

    2）將蛋白樣品和測試工作液 WR 按照 1:1（體積比）比例加入，充分混勻。在 60 度孵育 60 分鐘。

    3）孵育完成后冷卻到室溫，在 562nm 處讀取吸光度值。

    4）標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣品的吸光度值要扣除空白對照的吸光度值，然后進行濃度的計算。

    5）如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次測定。

 

附表

                             附表 1. 干擾物質(zhì)表

                                                        

化合物              耐受濃度               化合物              耐受濃度

                  緩沖液                             去垢劑和變性劑

乙酸鹽                0.2M              Brij35             1%

甘氨酸                 1M              CHAPS               1%

HEPES              0.1M             鹽酸胍                 4M

MES              50mM              NP-40               1%

MOPS              50mM              辛葡糖                 1%

Na+-檸檬酸             ＜1mM               SDS                1%

PIPES             50mM            Triton X-100          1%

磷酸鈉                0.1M                       糖類

乙酸鈉             0.2M pH 5.5         葡萄糖               10mM

TES              50mM               蔗糖                 1M

Tris             0.1M                      螯合劑

鹽類                         EDTA             10mM

                                                                       還原劑

硫酸銨                干擾

NaCl               1M            β-巰基乙醇               50μM

尿素                 3M               DTT               1mM

極性化合物                                  其他

DMSO                5%               脂類                干擾

甘油                10%            HCl/NaOH             0.1M

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