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慶大霉素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
更新時(shí)間:2020-12-08 點(diǎn)擊量:1721

 

慶大霉素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

 

一、原理

 

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物慶大霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗慶大霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物慶大霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物慶大霉素的含量。

 

二、試劑盒特性

 

  • 試劑盒靈敏度:  0.05ppb

 

u 孵育溫度: 25

 

u 孵育時(shí)間: 30min15min

 

  • 樣本檢測(cè)下限

 

組織 ············································

2.5 ppb

肝臟

··············································

3 ppb

牛奶

··············································

3 ppb

 

  • 交叉反應(yīng)率

 

慶大霉素

······································

100%

鏈霉素

·······································

<1%

雙氫鏈霉素 ········································

<1%

新霉素

··········································

<1%

 

  • 樣本回收率

 

組織 ······································ 90%±20%

 

肝臟 ······································ 80%±20%

 

牛奶 ·······································   90%±18%

 

三、試劑盒組成

 

1

微量測(cè)試孔

每條 8 孔,一板 12 條

 

 

 

 

 

標(biāo)準(zhǔn)液×6 瓶

0ppb

0.05ppb

2

0.15ppb

0.45ppb

1ml/瓶)

 

1.35ppb

4.05ppb

 

 

 

 

 

 

 

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

 

 

 

 

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

 

 

 

 

5

底物 A 液

7ml

白色帽

 

 

 

 

6

底物 B 液

7ml

黑色帽

 

 

 

 

7

終止液

7ml

黃色帽

 

 

 

 

8

20X 濃縮洗滌液

15ml

白色帽

 

 

 

 

9

樣本復(fù)溶液

50ml

透明帽

 

 

 

 

10

10x 濃縮提取液

50ml

藍(lán)色帽

 

 

 

 

 

四、所用儀器、試劑

 

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、恒溫箱

 

微量移液器:?jiǎn)蔚?20200µl、單道 1001000µl、多道 30300 µl

 

五、樣本前處理步驟

 

  • 樣本處理前須知

 

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

 

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

  • 樣本前處理需配制:配液 1 樣本提取液:

 

  • 10X 濃縮提取液用去離子水按 19 稀釋。
  • 樣本處理:

 

a)組織(雞肉、豬肉、魚肉、蝦)、肝臟(雞肝、豬肝)樣本處理方法

1、取 1±0.05g 去除脂肪的粉碎樣本,加入 5ml 樣本提取液,振蕩 3min;4000r/min,室溫離心

 

10min;2、取 50µl 上清液,加入 450µl 樣本復(fù)溶液混勻,

 

混合 30s;3、取 50µl 用于分析。

 

樣本稀釋倍數(shù):50

 

b) 牛奶樣本處理方法

 

1、取 0.5ml 均質(zhì)的牛奶樣本,加入 2ml 樣本提取

 

液,振蕩 2min;4000r/min,室溫離心 5min;2、取 50µl 上清液,加入 450µl 樣本復(fù)溶液混勻,

混合 30s3、取 50µl 用于分析。

 

樣本稀釋倍數(shù):50

 六、酶標(biāo)免疫分析程序:

 測(cè)定前應(yīng)須知:

 1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫2025℃)。

 2、 使用之后立即將所有試劑放回 28℃。

 3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定程序中的要點(diǎn)。

 4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

 1、從 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

 2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于 2-8℃。

 3、配液:將 15ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 119 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份

去離子水),或按所需用量配制洗滌液。4、編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

 5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物 50µl/孔,然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

 6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 45 次,每次間隔 1530 秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

 7、顯色:加入底物 A  50µl/孔,再加入底物 B 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色 15min

 8、測(cè)定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長(zhǎng) 450/630n m 檢測(cè),5min 內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔 OD 值。

 七、結(jié)果判定

 結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含慶大霉素量成負(fù)相關(guān)。

 1、粗略判定:

 用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:

 0ppb  2.243;0.05ppb  1.8160.15ppb  1.415; 0.45ppb  0.74;1.35ppb  0.313;4.05ppb  0.155。則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb4.05ppb;樣本 2的濃度范圍是 0.15ppb0.45ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實(shí)際濃度。

2、定量分析

 1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第-個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以 100%,即

 

B

百分吸光率(%)= ×100%

B0

 

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

 2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實(shí)際濃度。

 若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

 

 八、 注意事項(xiàng)

 

1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

 2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

 3、混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

 4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

 5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

 6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

 7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

 8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

 九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

 

1、儲(chǔ)藏條件:試劑盒于 28℃保存,不要冷凍。

 2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

 

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

 

 

 

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