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                                                                                                    規(guī)格：100 管/48 樣

土壤脫氫酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 試劑盒說(shuō)明書

微量法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì) 有機(jī)物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。

測(cè)定原理：

氫受體 2, 3, 5 -  氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細(xì)胞呼 吸過(guò)程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟 (Triphenyl Formazone, TF)，TF  呈現(xiàn)紅色，在波 長(zhǎng) 485nm 處有最大吸收峰，采用分光光度法于 485nm測(cè)定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品：

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比 色皿/96  孔板、冰、蒸餾水、丙酮 (不允許快遞，請(qǐng)用戶自備)。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1  瓶，使用前加 5mL  水溶解，4℃避光保存 (盡量現(xiàn)配現(xiàn)用)。 試劑二：液體 20mL×1  瓶，4℃保存。

試劑三：丙酮， 自備。

樣品處理：

1.  土壤樣品：準(zhǔn)確稱取過(guò) 40  目篩的新鮮土壤樣品約 0. 1g(以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸)。

2.  污泥樣品：污泥用蒸餾水洗滌，10000g ，25℃ ，離心 10min ，棄上清，反復(fù) 3-4 次。 測(cè)定步驟和操作表：

1 、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 0min ，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 485nm。

2 、操作表

對(duì)照管測(cè)定管

樣品 (g)0.050.05

試劑一 (mL)0.1

試劑二 (mL)0.20.1

置于 EP  管中，充分混勻，37℃ ，暗培養(yǎng) 6h ，取出后立即冰浴 5min

試劑三 (mL)0.10.1

反復(fù)震蕩數(shù)次，37℃保溫 10min ，10000g ，4℃ ，離心 5min ，取 200μL  上清于微量石英比色 皿/96  孔板，對(duì)照管調(diào)零，測(cè)定 A 485  。

脫氫酶活力計(jì)算：

酶活單位定義：

在 37℃時(shí)，每克樣品每小時(shí)使反應(yīng)體系 OD  值每增加 0.01 為一個(gè)酶活單位。 計(jì)算公式：脫氫酶活性 (U/g) =A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T ：培養(yǎng)時(shí)間，h；W：樣品質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1.  配制好的試劑一避光保存于 4℃ ，最好在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。

2.  試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，戴乳膠手套操作。

3.  反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng)，并去除干凈殘留的反應(yīng)液。

4.  如果測(cè)定出來(lái)的吸光值較大，減少樣品用量再進(jìn)行測(cè)定。

5.  試劑盒 2-8℃保存。

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