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SK-OV-3+luc人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記
更新時(shí)間:2024-08-04 點(diǎn)擊量:210

SK-OV-3+luc人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

,SK-OV-3/luc

貨號(hào):YJ-0081a(STR(SK-OV-3鑒定))

價(jià)格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細(xì)胞介紹

SK-OV-3G.TrempeL.J.Old1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到。 此細(xì)胞對(duì)腫瘤壞死因子和幾種細(xì)胞毒性藥物包括白喉毒素、順鉑和阿霉素均耐受。 在裸鼠中致瘤,且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1 來(lái)源:卵巢腺癌,腹水轉(zhuǎn)移

2 形態(tài):上皮細(xì)胞樣  貼壁生長(zhǎng)

3 含量:>1*10 6細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類(lèi)推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1 準(zhǔn)備McCoy's 5A(推薦YJ-0011)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

SK-OV-3+luc人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記


對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mLT752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):



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